ウイルス量

ウイルス量 、 ウイルス量 、 ウイルス力価 、またはウイルス力 価としても知られているウイルス量は、特定の体積のウイルス量の数値表現です。多くの場合、アッセイのタイプに応じて、ウイルス粒子、またはmLあたりの感染粒子として表されます。より高いウイルス量、力価、またはウイルス量は、しばしば活発なウイルス感染の重症度と相関します。ウイルス/ mLの量は、関与する体液中のウイルスのライブ量を推定することで計算できます。たとえば、血漿1ミリリットルあたりのRNAコピー数で指定できます。ウイルス量の追跡は、慢性ウイルス感染中、および骨髄や固形臓器移植から回復した患者などの免疫不全患者の治療を監視するために使用されます。現在、HIV-1、サイトメガロウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルスの定期検査が利用可能です。

HIVのウイルス量モニタリングは、HIV患者の治療に特に関心があります。これは、HIV / AIDSの管理の文脈で継続的に議論されているためです。

ウイルス負荷テストの技術

Puren らによる2010年のレビュー研究。（1）米国で食品医薬品局（FDA）の認可を受けて市販されている核酸増幅試験（NATまたはNAAT）、または欧州経済地域（EEA）で市販されているウイルス負荷試験を3つのタイプに分類します。 CEマーキング; （2）「Home-brew」または社内NAT。（3）非核酸ベースのテスト。

核酸ベースのテスト（NAT）

NATを使用してウイルス量を定量化するための多くの異なる分子ベースのテスト方法があります。増幅の出発材料を使用して、これらの分子法を3つのグループに分けることができます。

核酸自体を使用する標的増幅。より一般的な方法のほんの一部
- ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）in vitro DNA合成では、DNAテンプレート、ポリメラーゼ、バッファー、プライマー、およびヌクレオチドを使用して血液サンプル中のHIVを増殖させます。その後、化学反応によりウイルスにマークが付けられます。ウイルスの量を計算するために。統合されたDNAを定量化するためにPCRが使用されます
- 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）は、ウイルスRNAの定量に使用できるPCRのバリエーションです。 RNAはこの方法の出発物質として使用され、酵素逆転写酵素（RT）を使用して二本鎖DNAに変換されます
- Nucleic Acid Sequence Based Amplification（NASBA）メソッドは、PCRの転写ベースの増幅システム（TAS）バリエーションです。 RNAがターゲットとして使用され、DNAコピーが作成されます。次に、DNAコピーはRNAに転写され、増幅されます。 TASの商用のバリエーションがいくつかあります。転写媒介増幅（TMA）、および自立配列複製（3SR）
プローブ特異的増幅では、標的配列に優先的に結合する合成プローブを使用します。プローブは増幅されます
シグナル増幅では、サンプルに元々存在する増幅されていないターゲットに結合した大量のシグナルを使用します。一般的に使用される方法：
- 分岐DNA（bDNA）メソッドでは、DNAまたはRNAのいずれかをターゲット核酸として使用できます。固体支持体に取り付けられ、標的核酸を捕捉する短いプローブ。追加のエクステンダープローブは、標的核酸と、ウイルス数に変換されるシグナル強度を増加させるために使用される多数のレポーター分子にも結合します。

ウイルス負荷テストのコンポーネント

標本

EDTA血漿は、RNAベースのウイルス負荷試験に最適な無細胞ウイルスRNA源です。検体の収集、保管、バイオセーフティ対策の検討が不可欠です。血漿からのRNAの抽出には、特殊な機器、試薬、およびトレーニングが必要であり、限られたリソースで中小規模の研究室の手が届かない場所に配置されます。 50コピー/ mLの直線範囲で底を打つには、大きなサンプル（> 1 mLの血漿）が必要であり、静脈穿刺が必要です。この線形範囲は、治療のモニタリングに最適です。 1000コピー/ mLを超えるより高い線形範囲が許容される場合、指先は幼児期のHIV感染の診断に十分な標本を提供します。

EDTA血漿は、室温で30時間、4°Cで14日間、-70°Cで長期間保存できますが、ウイルス量のシグナルは大幅に減少しません。乾燥した血漿スポット（DPS）や指のスティックからの乾燥した血液スポット（DBS）などの小さな血液検体のRNAは、4週間から1年の範囲の室温で安定していると報告されています。ウイルスは乾燥サンプルで不活化されるため、検体の取り扱いによる危険が軽減されます。 DBSとDPSはウイルス負荷テストで正常に評価されましたが、線形範囲は3 log10または4 log10コピー/ mLです。この感度不足のため、乾燥標本はHIVスクリーニングには役立ちますが、ウイルス量の測定には役立ちません。

測定中

ウイルス量は通常、血液1ミリリットル（mL）中のHIVのコピーとして報告されます。ウイルス量の変化は、通常、ログの変化として報告されます（10の累乗）。たとえば、ウイルス量の3ログの増加（3 Log10）は、以前に報告されたレベルの103倍または1000倍の増加ですが、500,000から500コピーへの低下は3ログの低下（3 Log10）です。