免疫電気泳動

免疫電気泳動は、電気泳動および抗体との反応に基づいたタンパク質の分離および特性評価のための多くの生化学的方法の一般名です。免疫電気泳動のすべてのバリアントには、抗体としても知られる免疫グロブリンが必要であり、分離または特性評価されるタンパク質と反応します。この方法は、20世紀後半に開発され、広く使用されました。やや年代順：免疫電気泳動分析（1次元免疫電気泳動法とグラバール）、交差免疫電気泳動法（2次元定量的免疫電気泳動法とクラークおよびフリーマンまたはad modumローレル）、ロケット免疫電気泳動法（1次元定量的免疫電気泳動法とローレル）、融合ロケット免疫電気泳動広告modum SvendsenとHarboe、親和性免疫広告modum BOG-ハンセン。

高pH（約8.6）で緩衝された厚さ約1 mmの1％ゲルスラブとしてのアガロースは、電気泳動および抗体との反応に伝統的に好まれます。アガロースは、タンパク質の自由な通過と分離を可能にする大きな孔を持っているため、ゲルマトリックスとして選択されましたが、タンパク質と特定の抗体の免疫沈降のアンカーを提供します。抗体は高pHで実質的に不動であるため、高pHが選択されました。電気泳動には、通常、水平冷却プレートを備えた電気泳動装置が推奨されました。

免疫沈降物は湿ったアガロースゲルで見られることがありますが、乾燥ゲルではクーマシーブリリアントブルーのようなタンパク質染色で染色されています。 SDS-ゲル電気泳動とは対照的に、アガロースの電気泳動では、調査中のタンパク質のネイティブな構造と活性を保持するネイティブな条件が可能になるため、免疫電気泳動では、電気泳動分離に加えて酵素活性やリガンド結合などの特性評価が可能になります。

免疫電気分析広告modum Grabarは、免疫の古典的な方法です。タンパク質は電気泳動によって分離され、分離されたタンパク質の隣のトラフに抗体が適用され、分離されたタンパク質と抗体が相互に拡散した後、免疫沈降物が形成されます。免疫電気泳動分析の導入は、タンパク質化学を大きく後押しし、最初の結果のいくつかは、体液および生物学的抽出物中のタンパク質の分離でした。行われた重要な観察の中には、血清中の多数の異なるタンパク質、いくつかの免疫グロブリンクラスの存在、およびそれらの電気泳動的不均一性がありました。

Counterimmunoelectrophoresisで区切られたマラリア原虫のグルタミン酸脱水素酵素（pGluDH）

クロス免疫はまた、二次元の定量的免疫広告modumクラークとフリーマンや広告modumローレルと呼ばれています。この方法では、タンパク質は最初に1次元目の電気泳動中に分離され、次に抗体への拡散の代わりに、タンパク質が2次元目の抗体含有ゲルに電気泳動されます。免疫沈降は2次元目の電気泳動中に行われ、免疫沈降物は特徴的な鐘型を持ち、各沈殿物は1つの抗原を表し、沈殿物の位置はタンパク質の量とゲル内の特定の抗体の量に依存するため、相対定量化を実行できます。交差免疫電気泳動の感度と分解能は、従来の免疫電気泳動分析の感度と分解能よりも高く、さまざまな目的に役立つ手法には複数のバリエーションがあります。交差免疫電気泳動は、体液、特にヒト血清、および生物学的抽出物中のタンパク質の研究に使用されています。

ロケット免疫電気泳動は、一次元の定量的免疫電気泳動です。この方法は、自動化された方法が利用可能になる前に、ヒト血清タンパク質の定量に使用されてきました。

融合ロケット免疫電気泳動は、タンパク質分離実験からの画分中のタンパク質の詳細な測定に使用される、一次元の定量的免疫電気泳動の修正です。

親和性免疫電気泳動は、特定の相互作用または他の高分子またはリガンドとの複合体形成によるタンパク質の電気泳動パターンの変化に基づいています。アフィニティ免疫電気泳動は、レクチンなどの結合定数の推定や、グリカン含有量やリガンド結合などの特定の機能を備えたタンパク質の特性評価に使用されています。アフィニティー免疫電気泳動のいくつかのバリアントは、固定化リガンドの使用によるアフィニティークロマトグラフィーに類似しています。

アガロースゲル内の免疫沈降物の開いた構造により、放射性標識抗体の追加の結合が可能になり、特定のタンパク質が明らかになります。このバリエーションは、IgEとの反応によるアレルゲンの同定に使用されています。

2つの要因が、免疫電気泳動法が広く使用されていないことを決定します。第一に、彼らはかなり作業集約的であり、いくつかの手動の専門知識が必要です。第二に、かなり大量のポリクローナル抗体が必要です。現在、操作が簡単で、感度が高く、特定の抗体を必要としないため、ゲル電気泳動とそれに続くエレクトロブロッティングがタンパク質の特性評価に適した方法です。さらに、タンパク質は見かけの分子量に基づいてゲル電気泳動で分離されますが、これは免疫電気泳動では達成されませんが、非還元条件が必要な場合でも免疫電気泳動法は有用です。