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しみ(生物学)

分子生物学および遺伝学におけるブロットとは、タンパク質、DNAまたはRNAを担体(ニトロセルロース、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)またはナイロン膜)に転写する方法です。多くの場合、これはゲル電気泳動の後に行われ、分子をゲルからブロッティング膜に移し、他の場合はサンプルを膜に直接加えます。ブロッティングの後、転送されたタンパク質、DNA、またはRNAは、着色剤染色(タンパク質の銀染色など)、放射性標識分子のオートラジオグラフィーによる視覚化(ブロットの前に実行)、またはいくつかのタンパク質または核酸の特定の標識によって視覚化されます。後者は、ブロットの一部の分子にのみ結合し、酵素が結合した抗体またはハイブリダイゼーションプローブで行われます。適切な洗浄後、この酵素活性(およびブロットで検索する分子)は、適切な反応性でインキュベートすることにより視覚化され、ブロット上に色付きの堆積物または写真フィルムで記録される化学発光反応のいずれかとなります。

サザンブロット

サザンブロットは、DNA試料中の特定のDNA配列を検出するために分子生物学で日常的に使用される方法です。サザンブロット法は、電気泳動で分離されたDNAフラグメントのフィルター膜への転写と、それに続くプローブハイブリダイゼーションによるフラグメント検出を組み合わせたものです。

ウエスタンブロット

複雑なサンプル中の特定のタンパク質の検出には、ウェスタンブロットが使用されます。タンパク質は、適切なブロッティングマトリックス(通常はPVDFまたはニトロセルロース)に移された後、抗体で検出される前に、電気泳動を使用してサイズによって最初に分離されます。

極西部のしみ

ウェスタンブロットと同様に、ファーウェスタンブロットはタンパク質間相互作用を使用して、ブロッティングマトリックスに固定された特定のタンパク質の存在を検出します。次に、抗体を使用してタンパク質-タンパク質複合体の存在を検出し、ファーウェスタンブロットをウェスタンブロットの特定のケースにします。 。

南西部のしみ

サウスウェスタンブロットは、サザンブロット法に基づいており、特定のオリゴヌクレオチドプローブに結合する能力により、DNA結合タンパク質を同定および特性評価するために使用されます。タンパク質はゲル電気泳動によって分離され、その後他のタイプのブロッティングと同様にニトロセルロース膜に転写されます。

イースタンブロット

イースタンブロットは、タンパク質の特定の翻訳後修飾の検出に使用されます。タンパク質はゲル電気泳動によって分離された後、ブロッティングマトリックスに移され、特定の基質(コレラ毒素、コンカナバリン、ホスホモリブデートなど)または抗体によって翻訳後修飾が検出されます。

極東部のしみ

Far-Easternブロットは、脂質結合オリゴ糖の検出用です。高性能薄層クロマトグラフィーは、最初に物理的および化学的特性によって脂質を分離するために使用され、次にオリゴ糖が特定の結合タンパク質(抗体またはレクチン)によって検出される前にブロッティングマトリックスに移されます。

ノーザンブロット

ノーザンブロットは、複雑なサンプル中の特定のRNA配列を検出するためのものです。ノーザンブロット法では、まずゲル電気泳動でサイズごとにサンプルを分離してから、ブロットマトリックスに移し、標識RNAプローブで検出します。

逆ノーザンブロット

逆ノーザンブロット法は、DNAがブロッティングマトリックスに最初に固定され、標識RNAプローブで特定の配列が検出されるという点で、ノーザンブロット法とサザンブロット法の両方と異なります。

ドットブロット

ドットブロットは、ブロッティングの前に電気泳動によってサンプルを分離するのではなく、分析物がブロッティングマトリックスに直接追加される(および「ドット」として表示される)上記のいずれかの特殊なケースです。

ブロットのリスト

  • RNAのノーザンブロット
  • RNAのリバースノーザンブロット
  • タンパク質のウエスタンブロット
  • タンパク質間相互作用の極西部のしみ
  • 翻訳後修飾のイースタンブロット
  • 糖脂質の極東ブロット
  • ドットブロット
  • DNAのサザンブロット